Fluorescence in situ hybridization sa isda. Fluorescent in situ hybridization (FISH) na pamamaraan sa pag-diagnose ng mga chromosomal disease. Fluorescent in situ hybridization method. Ang isda ay naging malawak na magagamit

Ang FISH (fluorescent in situ hybridization) ay isang kailangang-kailangan na paraan sa pag-diagnose ng cancer. Gamit ang mga tiyak na fluorescent probes, ginagawang posible ng pamamaraang ito na matukoy ang pagkakaroon ng genomic rearrangements, iyon ay, upang linawin ang diagnosis, linawin ang pagbabala at pumili ng sapat na therapy, depende sa partikular na kaso. Una sa lahat, ang diskarte na ito ay ginagamit para sa mga sakit na oncohematological. Noong nakaraan, ang maginoo na karyotyping ay ginamit para sa mga layuning ito, ngunit kung ang mga selula ng pasyente ay hindi nagpapakita ng makabuluhang paglaki sa kultura, ito ay seryosong nagpapalubha ng diagnosis gamit ang pamamaraang ito. Sa mga kasong ito, ang paggamit ng FISH ay makabuluhang nagpapalawak ng mga kakayahan ng mga diagnostic sa laboratoryo. Bilang karagdagan, ang mga kumplikadong chromosomal rearrangements ay mas madaling bigyang-kahulugan gamit ang FISH.

Gumagamit ang laboratoryo ng mga probe sa mga sentromer, mga partikular na rehiyon ng chromosome, at mga gene. Pinipili ang dalawang kulay na probe upang maghanap ng mga pagsasalin sa paraang kung ang mga fragment ng dalawang gene, na karaniwang matatagpuan sa iba't ibang bahagi ng genome, ay nasa malapit, dalawang signal iba't ibang Kulay- isa mula sa bawat probe, sumanib sa isa, naiiba sa liwanag mula sa mga orihinal. Kaya, halimbawa, kinikilala nila ang karaniwan sa mga leukemia iba't ibang uri Mga pagsasalin ng BCR-ABL. Ang mga gene tulad ng MLL, TEL at RARα ay maaaring muling ayusin ang kanilang mga sarili upang bumuo ng mga chimeric gene na may iba't ibang pagkakasunud-sunod. Sa kasong ito, dalawang probe ang nilalapitan iba't ibang rehiyon gene. Kung ang gene ay buo, magkakaroon ng isang tuldok sa bawat nucleus sa ispesimen; Dahil dito, ang FISH ay isang mas nababaluktot na pamamaraan para sa pag-detect ng mga chromosomal translocation kaysa PCR. Ang probe ay uupo sa chromosome anuman ang eksaktong pagkasira at pagsasama ng isang fragment ng isa pang chromosome na naganap sa loob ng anumang partikular na rehiyon, hindi tulad ng oligonucleotides na ginagamit sa PCR, na kinikilala ang mga partikular, kahit na karaniwan, ng mga muling pagsasaayos.

Ang isang panel ng mga marker na nakita ng FISH ay nagpapahintulot sa isa na masuri ang pagbabala ng talamak na lymphoid leukemia. Ang mga pagtanggal ng 11q at 17p ay nauugnay sa isang hindi kanais-nais na pagbabala, habang ang mga pagtanggal ng 13q, tulad ng isang normal na karyotype, ay nauugnay sa isang paborable. Sa trisomy 12, ang kaso ay maaaring uriin bilang isang intermediate risk group.

Ang kategorya ng panganib para sa myeloma ay nauugnay din sa isang kumbinasyon ng mga pagtanggal at mga pagsasalin ng t(4;14), t(14;16) at 17p na pagtanggal ay nauugnay sa isang hindi kanais-nais na pagbabala. Ang ganitong mga diagnostic na pag-aaral ay ginagawa sa red bone marrow biopsy pagkatapos ng pagpapayaman. Ang isang maliit na pagbabaligtad, na sinamahan ng pagbuo ng chimeric EML4-ALK gene, ay katangian ng hindi maliit na cell lung cancer. Ang produkto ng chimeric gene ay isang target para sa naka-target na therapy. Ang ganitong mga muling pagsasaayos ay maaari ding makita gamit ang FISH method. Ang HER2 amplification ay madalas na tinatasa nang hindi direkta sa pamamagitan ng pagtaas ng mga antas ng expression gamit ang immunohistochemistry, ngunit sa ilang mga bansa inirerekomenda na gamitin ang FISH para sa layuning ito, o hindi bababa sa gamitin ang paraang ito para sa pagkumpirma.

Maikling sagot: Ang pamamaraan ng fluorescence in situ hybridization (FISH) ay nagsasangkot ng paggamit ng mga natatanging DNA nucleotide sequence bilang isang probe upang hanapin ang nais na mga sequence ng DNA sa materyal na nakuha mula sa pasyente. Ang pamamaraan ay batay sa komplementaryong pagbubuklod ng isang DNA probe sa DNA ng metaphase chromosome o interphase cells. Ang DNA probe at ang DNA na sinusuri ay na-denatured, at ang single-stranded na DNA ay nabuo. Ang DNA probe ay idinagdag sa paghahanda ng chromosome at incubated para sa isang tiyak na oras. Ang presensya o kawalan ng fluorochrome-labeled probe sa DNA pagkatapos ng hybridization ay natutukoy sa pamamagitan ng pagsusuri sa mga chromosome gamit ang fluorescence microscopy.

Detalyadong tugon: Paraan ng fluorescent hybridization sa lugar ng kinaroroonan nagbibigay-daan sa iyo na tukuyin ang mga indibidwal na chromosome o ang kanilang mga indibidwal na seksyon sa mga paghahanda ng metaphase chromosome o interphase nuclei batay sa komplementaryong interaksyon ng isang DNA probe na pinagsama sa isang fluorescent na label at ang nais na seksyon sa chromosome. Upang mailarawan ang mga peptide-nucleic acid compound sa chromosome, ginagamit ang mga PNA probes batay sa isang produktong protina.
Ang pamamaraan ay batay sa komplementaryong pagbubuklod ng DNA probe sa DNA ng metaphase chromosomes o interphase cells at kasama ang mga sumusunod na hakbang:
1. Denaturasyon double-stranded DNA probe at target na DNA sa single-stranded sa ilalim ng impluwensya mataas na temperatura o mga ahente ng kemikal.
2. Hybridization DNA probe na may target na DNA ayon sa prinsipyo ng complementarity upang bumuo ng double-stranded hybrid molecule
3. Paghuhugas ng post-hybridization upang alisin ang unhybridized DNA probe
4. Pagsusuri mga signal ng hybridization na may fluorescence microscope

Mga kalamangan Ang FISH molecular genetic diagnostic na pamamaraan ay kinabibilangan ng mabilis na pagsusuri Malaking numero mga cell, mataas na sensitivity at pagtitiyak, ang kakayahang mag-aral ng mga hindi naka-culture at hindi naghahati na mga cell.
Bahid Ang pamamaraan ay nakasalalay sa imposibilidad ng pagkuha ng impormasyon tungkol sa pisikal na estado ng DNA o chromosome na seksyon na pinag-aaralan.
Ang FISH ay ginagamit sa prenatal molecular genetic diagnosis at para sa tumor characterization; sa pediatric practice ito ay ginagamit, bilang panuntunan, upang matukoy ang mga submicroscopic na pagtanggal na nauugnay sa mga partikular na depekto sa pag-unlad. Ang mga sindrom batay sa mga microdeletion ay dating itinuturing na mga sakit ng hindi kilalang etiology, dahil ang mga chromosomal na pagtanggal at muling pagsasaayos na nagdudulot ng pag-unlad ng mga sakit na ito ay karaniwang hindi nakikita. tradisyonal na pamamaraan pagsusuri ng chromosome. Ang ganitong maliliit na pagtanggal sa mga partikular na rehiyon ng mga chromosome ay maaaring matukoy nang may mahusay na katumpakan ng FISH. Kasama sa mga sakit na dulot ng mga submicroscopic na pagtanggal Prader-Willi, Angelman, Williams, Miller-Diecker, Smith-Magenis syndromes at velocardiofacial syndrome. Pinapadali ng FISH ang pag-diagnose ng mga sindrom na ito sa mga hindi tipikal na kaso, lalo na sa pagkabata, kapag wala pa rin ang maraming diagnostic na makabuluhang palatandaan ng sakit. Ang paggamit ng pamamaraang ito ng molecular genetic diagnosis ay ipinapayong din sa pagbibinata at pagtanda, kapag karaniwang Mga klinikal na palatandaan mga sakit na katangian ng pagkabata, ay sumasailalim sa mga pagbabago.

121. DNA probe. Ang kanilang paggamit sa pagtukoy ng mga namamana na sakit.

Maikling pagsusuri

DNA probe ay isang maikling fragment ng DNA na pinagsama-sama ng fluorescein, isang enzyme, o isang radioactive isotope, na ginagamit para sa hybridization sa komplementaryong rehiyon ng target na molekula ng DNA.

Pangunahing bahagi

Mga sistema ng diagnostic ng DNA

Ang impormasyon tungkol sa buong iba't ibang katangian ng isang organismo ay nakapaloob sa genetic material nito. Kaya, ang pathogenicity ng bakterya ay natutukoy sa pamamagitan ng pagkakaroon ng isang tiyak na gene o hanay ng mga gene, at ang isang namamana na genetic na sakit ay nangyayari bilang isang resulta ng pinsala sa isang tiyak na gene. Ang segment ng DNA na tumutukoy sa biological na katangiang ito ay may mahigpit na tinukoy na pagkakasunud-sunod ng nucleotide at maaaring magsilbi bilang isang diagnostic marker.

Ang batayan ng maraming mabilis at maaasahang mga pamamaraan ng diagnostic ay ang hybridization ng mga nucleic acid - ang pagpapares ng dalawang pantulong na mga segment ng iba't ibang mga molekula ng DNA. Pamamaraan sa pangkalahatang balangkas ay ang mga sumusunod.

1. Pag-aayos ng isang single-stranded na target na DNA sa isang filter ng lamad.

2. Paglalapat ng may label na single-stranded DNA probe, na, sa ilalim ng ilang partikular na kundisyon (temperatura at lakas ng ionic), ay pares sa target na DNA.

3. Hugasan ang filter upang alisin ang labis na unbound na may label na DNA probe.

4. Detection ng probe/target na hybrid molecules.

Sa mga diagnostic test batay sa nucleic acid hybridization, tatlong bahagi ang susi: isang DNA probe, isang target na DNA, at isang paraan para sa pag-detect ng hybridization signal. Ang sistema ng pagtuklas ay dapat na nasa pinakamataas na antas tiyak at lubhang sensitibo.

*Fluorescein (dioxyfluorane, uranine A) ay isang organic compound, isang fluorescent dye. Sa analytical chemistry, ang fluorescein ay ginagamit bilang isang luminescent acid-base indicator. Sa biochemistry at molecular biology, ang fluorescein isothiocyanate derivatives ay ginagamit bilang biological dyes para sa pagtukoy ng mga antigen at antibodies.

* Ang pagtuklas ay ang pagtuklas, pagkakakilanlan, paghahanap ng isang bagay.

*conjugation=conjugation

*Kung ang pinaghalong DNA, halimbawa, ang tao at mouse, ay natunaw at na-annealed sa isang "test tube," kung gayon ang ilang mga seksyon ng mga chain ng DNA ng mouse ay muling magsasama-sama sa mga pantulong na seksyon ng mga chain ng DNA ng tao upang bumuo ng mga hybrid. Ang bilang ng mga naturang site ay depende sa antas ng pagkakaugnay ng mga species. Ang mas malapit ang mga species ay sa isa't isa, mas maraming mga lugar ng DNA strand complementarity mayroong. Ang kababalaghang ito ay tinatawag DNA-DNA hybridization.

122. Mga pamamaraan at kundisyon para sa paggamit ng direktang DNA diagnostics.

Maikling pagsusuri:

Gamit ang mga direktang pamamaraan, ang mga iregularidad sa pangunahing nucleotide sequence ng DNA (mutations at kanilang mga uri) ay nakita. Ang mga direktang pamamaraan ay nailalarawan sa pamamagitan ng katumpakan na umaabot sa halos 100%.

Ang layunin ng direktang pagsusuri ay upang matukoy ang mga mutant alleles (mga abnormalidad sa pangunahing pagkakasunud-sunod ng nucleotide ng DNA, mga mutasyon at kanilang mga uri).

Ang kawalan ng direktang pamamaraan ng diagnostic ng DNA ay ang pangangailangang malaman ang eksaktong lokasyon ng gene at ang spectrum ng mga mutasyon nito. Ang mga direktang pamamaraan ng diagnostic ng DNA ay ipinahiwatig para sa mga sakit tulad ng phenylketonuria (mutation R408W), cystic fibrosis (ang pinakakaraniwang mutation delF508), Huntington's chorea (pagpapalawak ng trinucleotide repeats - CTG repeats), atbp.

Buong sagot:

Gamit ang mga direktang pamamaraan, ang mga iregularidad sa pangunahing nucleotide sequence ng DNA (mutations at kanilang mga uri) ay nakita. Ang mga direktang pamamaraan ay nailalarawan sa pamamagitan ng katumpakan na umaabot sa halos 100%. Gayunpaman, sa pagsasagawa, ang mga pamamaraang ito ay maaaring gamitin sa ilalim ng ilang mga kundisyon:

1) kilalang cytogenetic localization ng gene na responsable para sa pagbuo ng isang namamana na sakit,

2) ang gene ng sakit ay dapat na ma-clone at ang nucleotide sequence nito ay dapat malaman.

Ang layunin ng direktang pagsusuri ay upang matukoy ang mga mutant alleles (mga abnormalidad sa pangunahing pagkakasunud-sunod ng nucleotide ng DNA, mga mutasyon at kanilang mga uri). Ang mataas na katumpakan ng direktang pamamaraan ng diagnostic ng DNA sa karamihan ng mga kaso ay hindi nangangailangan ng pagsusuri sa DNA ng lahat ng miyembro ng pamilya, dahil ang pagkilala sa isang mutation sa kaukulang gene ay ginagawang posible upang kumpirmahin ang diagnosis na may halos 100% na katumpakan at matukoy ang genotype ng lahat ng miyembro ng pamilya ng isang may sakit na bata, kabilang ang mga heterozygous carrier.

Ang kawalan ng direktang pamamaraan ng diagnostic ng DNA ay ang pangangailangang malaman ang eksaktong lokasyon ng gene at ang spectrum ng mga mutasyon nito.

Ang mga direktang pamamaraan ng diagnostic ng DNA ay ipinahiwatig para sa mga sakit tulad ng phenylketonuria (mutation R408W), cystic fibrosis (ang pinakakaraniwang mutation delF508), Huntington's chorea (pagpapalawak ng trinucleotide repeats - CTG repeats), atbp.

Gayunpaman, hanggang ngayon, ang mga gene ng maraming sakit ay hindi pa namamapa, ang kanilang exon-intron na organisasyon ay hindi kilala, at maraming mga namamana na sakit ay nailalarawan sa pamamagitan ng binibigkas na genetic heterogeneity, na hindi pinapayagan ang buong paggamit ng mga direktang pamamaraan ng diagnostic ng DNA. Samakatuwid, ang nilalaman ng impormasyon ng direktang pamamaraan ng diagnostic ng DNA ay malawak na nag-iiba. Kaya, kapag nag-diagnose ng Huntington's chorea, achondroplasia, ito ay 100%, para sa phenylketonuria, cystic fibrosis, adrenogenital syndrome - mula 70 hanggang 80%, at para sa Wilson-Konovalov disease at Duchenne/Becker myopathy - 45-60%. Sa pagsasaalang-alang na ito, ang mga hindi direktang pamamaraan ng molekular na genetic diagnosis ng mga namamana na sakit ay ginagamit.

FISH - fluorescent in situ hybridization (fluorescent in situ hybridization).

Sa situ hybridization ay nagbibigay-daan sa amin upang matukoy kung saan chromosome segment ang kaukulang marker ay matatagpuan. Ginagawang posible ng fluorescence in situ hybridization na sabay-sabay na mapa ang ilang magkakaibang kulay na mga marker ng DNA, at ang interphase hybridization ay nagpapahintulot sa amin na matukoy ang pagkakasunud-sunod ng mga marker sa magkahiwalay na lugar mga chromosome. Gamit ang pamamaraang ito, ang mga abnormalidad ng chromosomal ay maaasahang matukoy.

Ang mga paghahanda ng mga nakapirming chromosome ay hybridized (incubated sa mataas na temperatura na sinusundan ng paglamig) na may mga nucleotide sequence sa ilalim ng pag-aaral, na may label na may radioactive, fluorescent o iba pang label. Pagkatapos hugasan ang hindi nakatali na label, ang natitirang may label na nucleic acid molecule ay nauugnay sa mga chromosomal na rehiyon na naglalaman ng mga sequence na pantulong sa may label na nucleotide sequence sa ilalim ng pag-aaral. Ang mga resultang hybrid ay sinusuri gamit ang isang mikroskopyo nang direkta o pagkatapos ng autoradiography. Ang pangkat ng mga pamamaraan na ito ay nailalarawan sa pamamagitan ng isang mas mataas na resolusyon kaysa sa somatic cell hybridization, dahil pinapayagan nila ang lokalisasyon ng mga pagkakasunud-sunod ng nucleotide na pinag-aaralan sa mga kromosom.

Isang modernong paraan ng cytogenetic analysis na ginagawang posible upang matukoy ang husay at dami ng mga pagbabago sa mga chromosome (kabilang ang mga pagsasalin at microdeletion) at ginagamit para sa differential diagnosis ng mga malignant na sakit sa dugo at mga solidong tumor.

Mga kasingkahulugang Ruso

Fluorescence in situ hybridization

Pagsusuri ng ISDA

Ingles na kasingkahulugan

Fluorescence sa lugar ng kinaroroonan hybridization

Paraan ng pananaliksik

Fluorescence in situ hybridization.

Anong biomaterial ang maaaring gamitin para sa pananaliksik?

Tissue sample, tissue sample sa paraffin block.

Paano maayos na maghanda para sa pananaliksik?

Walang kinakailangang paghahanda.

Pangkalahatang impormasyon tungkol sa pag-aaral

Fluorescent in situ hybridization (FISH, mula sa English fluorescence sa- lugar hybridization) ay isa sa mga pinaka-modernong pamamaraan para sa pag-diagnose ng mga abnormalidad ng chromosomal. Ito ay batay sa paggamit ng mga fluorescently na may label na DNA probes. Ang mga DNA probes ay espesyal na synthesize ng mga fragment ng DNA, ang pagkakasunud-sunod nito ay pantulong sa pagkakasunud-sunod ng DNA ng mga aberrant chromosome na pinag-aaralan. Kaya, ang mga pagsusuri sa DNA ay naiiba sa komposisyon: iba't ibang, tiyak na mga pagsusuri sa DNA ay ginagamit upang makita ang iba't ibang mga abnormalidad ng chromosomal. Ang mga DNA probe ay nag-iiba din sa laki: ang ilan ay maaaring idirekta sa isang buong chromosome, ang iba sa isang partikular na locus.

Sa panahon ng proseso ng hybridization, kung ang mga aberrant chromosome ay naroroon sa sample sa ilalim ng pag-aaral, sila ay nagbubuklod sa DNA probe, na, kapag sinusuri gamit ang isang fluorescence microscope, ay tinutukoy bilang isang fluorescent signal (positibong resulta ng FISH test). Sa kawalan ng mga aberrant chromosome, ang mga hindi nakatali na DNA probes ay "hugasan" sa panahon ng reaksyon, na, kapag sinusuri gamit ang isang fluorescence microscope, ay tinukoy bilang kawalan ng isang fluorescent signal (negatibong resulta ng pagsubok sa FISH). Pinapayagan ka ng pamamaraan na suriin hindi lamang ang pagkakaroon ng isang fluorescent signal, kundi pati na rin ang intensity at localization nito. Kaya, ang FISH test ay hindi lamang isang qualitative, kundi isang quantitative method din.

Ang FISH test ay may ilang mga pakinabang sa iba pang mga cytogenetic na pamamaraan. Una sa lahat, ang pagsasaliksik ng FISH ay maaaring ilapat sa parehong metaphase at interphase nuclei, iyon ay, sa hindi naghahati na mga selula. Ito ang pangunahing bentahe ng FISH kumpara sa mga klasikal na pamamaraan ng karyotyping (hal., Romanowsky-Giemsa chromosome staining), na inilalapat lamang sa metaphase nuclei. Ginagawa nitong mas tumpak na paraan ang FISH para sa pagtukoy ng mga abnormalidad ng chromosomal sa mga tisyu na may mababang aktibidad ng proliferative, kabilang ang mga solidong tumor.

Dahil ang FISH test ay gumagamit ng stable na DNA ng interphase nuclei, maaaring gamitin ang iba't ibang biomaterial para sa pag-aaral - fine-angle aspiration biopsy aspirates, smears, bone marrow aspirates, biopsy specimens at, mahalaga, napreserba ang mga fragment ng tissue, halimbawa histological blocks. Halimbawa, ang isang FISH test ay maaaring matagumpay na maisagawa sa mga paulit-ulit na specimen na nakuha mula sa isang histological block ng isang breast biopsy kapag kinukumpirma ang diagnosis ng breast adenocarcinoma at ang pangangailangan upang matukoy ang HER2/neu status ng tumor. Lalo na dapat itong bigyang-diin na sa sandaling ang pag-aaral ng FISH ay inirerekomenda bilang isang confirmatory test kapag ang isang hindi tiyak na resulta ng isang immunohistochemical na pag-aaral ng isang tumor para sa tumor marker na HER2/neu (IHC 2+) ay nakuha.

Ang isa pang bentahe ng FISH ay ang kakayahang makakita ng mga microdeletion na hindi natukoy ng classical na karyotyping o PCR. Ito ay partikular na kahalagahan kung ang DiGeorge syndrome at velocardiofacial syndrome ay pinaghihinalaang.

Ang FISH test ay malawakang ginagamit sa differential diagnosis ng mga malignant na sakit, pangunahin sa oncohematology. Ang mga abnormalidad ng Chromosomal kasama ang klinikal na larawan at data mula sa immunohistochemical studies ay ang batayan para sa pag-uuri, pagpapasiya ng mga taktika sa paggamot at pagbabala ng mga sakit na lympho- at myeloproliferative. Ang mga klasikong halimbawa ay ang talamak na myeloid leukemia - t (9;22), acute promyelocytic leukemia - t (15;17), talamak na lymphocytic leukemia - trisomy 12 at iba pa. Tulad ng para sa mga solidong tumor, ang pagsubok sa FISH ay kadalasang ginagamit sa pagsusuri ng kanser sa suso, Pantog, colon, neuroblastoma, retinoblastoma at iba pa.

Ang FISH testing ay maaari ding gamitin sa prenatal at preimplantation diagnosis.

Ang FISH test ay madalas na ginagawa kasama ng iba pang molecular at cytogenetic diagnostic na pamamaraan. Ang resulta ng pag-aaral na ito ay tinasa kasabay ng mga resulta ng karagdagang laboratoryo at instrumental na datos.

Ano ang ginagamit ng pananaliksik?

• Para sa differential diagnosis ng mga malignant na sakit (dugo at solidong organo).

Kailan naka-iskedyul ang pag-aaral?

• Kung ang pagkakaroon ng isang malignant na sakit sa dugo o mga solidong tumor ay pinaghihinalaang, ang mga taktika sa paggamot at pagbabala nito ay nakasalalay sa chromosomal na komposisyon ng tumor clone.

Ano ang ibig sabihin ng mga resulta?

Positibong resulta:

• Ang pagkakaroon ng mga aberrant chromosome sa sample ng pagsubok.

Negatibong resulta:

• Kawalan ng aberrant chromosome sa sample sa ilalim ng pag-aaral.

Ano ang maaaring makaapekto sa resulta?

• Bilang ng mga aberrant chromosome.

• Immunohistochemical na pag-aaral ng klinikal na materyal (gamit ang 1 antibody)
• Immunohistochemical na pag-aaral ng klinikal na materyal (gamit ang 4 o higit pang mga antibodies)
• Pagpapasiya ng katayuan ng tumor HER2 ng FISH
• Pagpapasiya ng katayuan ng tumor ng HER2 gamit ang pamamaraang CISH

Sino ang nag-utos ng pag-aaral?

Oncologist, pediatrician, obstetrician-gynecologist, geneticist.

Panitikan

• Wan TS, Ma ES. Molecular cytogenetics: isang kailangang-kailangan na tool para sa diagnosis ng kanser. Anticancer Res. 2005 Hul-Ago;25(4):2979-83.
• Kolialexi A, Tsangaris GT, Kitsiou S, Kanavakis E, Mavrou A. Epekto ng cytogenetic at molecular cytogenetic na pag-aaral sa hematologic malignancies. Chang Gung Med J. 2012 Mar-Abr;35(2):96-110.
• Mühlmann M. Molecular cytogenetics sa metaphase at interphase cells para sa cancer at genetic na pananaliksik, diagnosis at pagbabala. Application sa mga seksyon ng tissue at mga suspensyon ng cell. Genet Mol Res. 2002 Hun 30;1(2):117-27.